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细胞生物学研究方法

显微镜技术

肉眼:0.2mm;  光镜:0.2μm;  电镜:0.2nm

光学显微镜

  1. 普通~:分辨率由物镜决定

    性能指标:R=0.61λ/NA(白光波长500nm,NA数值孔径1.4? 介质相关

    总放大率:物镜*目镜,有效放大率:物镜的500-1000倍?

  2. 相差~:利用衍射and干涉,有相位板,环形光阑(衍射波慢 1/4 λ

    明反差:让直射光也慢1/4 λ,达到增强的效果(物体亮,背景暗

    暗反差:让衍射光再慢1/4 λ(物体暗,背景亮

    优点:可对未经染色的标本和活细胞进行显微内部结构的观察,提高分辨率

  3. 微分干涉~:偏振光,立体感,浮雕效果

  4. 暗视野~:丁达尔效应,观察样品结构的明亮轮廓但分辨不清内部结构

  5. 倒置~:照明在载物台上方,观测活细胞

  6. 荧光,检测细胞上的特异荧光染料;激光扫描共聚焦~:三维,清晰

电子显微镜

原理:电子束波长比光线短得多。其他各种设备略略略

冷冻蚀刻

过程:干冰/液氮冷冻---冰刀断裂---冰升华,蚀刻---倾斜喷镀碳膜(复型)---溶解生物组织---观测复型

立体感强,分辨率高,主要用于生物膜结构研究

细胞组分研究

离心

差速~:分离体积相差悬殊的,(不同速度下沉降分离出的东西不同

密度梯度~:用介质在离心管内形成密度梯度,离心使组分分层

速度沉降~:分离密度相近,体积不一的细胞组分

等密度沉降~:分析不同密度的细胞组分

其他

染色略略略,免疫放弃,

放射自显影(放射性标志物

模式生物:大肠杆菌(E.coli) 酵母(yeast) 果蝇(Drosophila) 线虫(C.elegans) 小鼠 (mouse) 拟南芥(Arabidopsisthaliana)